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真空转印仪使用该如何操作
点击次数:988 发布时间:2021-03-10
  真空转印仪使用需要剪一块尼龙膜,要求其大小比窗口密封垫的边缘至少宽0.5cm。再剪一张与尼龙膜大小一致的滤纸。剪一块窗口密封垫,要求密封垫的边缘比胶的边缘至少窄0.5cm。
 
  真空转印仪操作步骤:
 
  1.把尼龙膜以45度角方向浸入水中,润湿膜,然后在在合适的转印溶液中浸润膜。
 
  2.把孔状真空板置于平台上。依次放置润湿的滤纸,尼龙膜,用10ml的玻璃管赶走膜上的气泡。
 
  3.用水润湿密封O型环。
 
  4.把窗口密封垫置于膜上。确保密封垫覆盖住整个O型环。同时确保密封垫覆盖住滤纸/膜。请参照下图进行组装。
 
  5.把胶轻柔的置于密封垫上,覆盖住窗口。用玻璃管赶走气泡,确保胶的边缘超出密封垫至少5cm。
 
  6.把密封框置于顶部,锁住密封框。
 
  7.旋松(逆时针)真空调节阀几圈以防止强的内部真空。
 
  8.慢慢的旋紧调节阀直到读数为5inchesHg。如果使用Bio-Rad的真空泵,需要在转印前预热10分钟。如果不预热,真空泵升压会比较慢,约在10分钟后稳定。
 
  9.沿着窗口的边缘用手指轻轻的按住胶。此操作可帮助在胶和密封垫之间形成紧密的真空密封。
 
  10.轻轻的倒入1000至1500ml的转印缓冲液。检查胶是否移位。如果胶漂浮起来了,需要拆掉密封框,排干转膜液,重新按5至10步骤进行操作。
 
  11.把转印仪的盖子盖好。检查缓冲液的水平面,其高度应该高于胶。检查真空压力,调节至5inchesHg。
 
  12.在设定压力下转膜90分钟。
 
  转印后这样操作:
 
  1.90分钟后,关掉真空装置。
 
  2.打开密封框,把上层缓冲液排出。
 
  3.拿掉转印胶,位于窗口中的胶应该比位于窗口外的胶薄一半。检查胶中剩余的DNA,可以用EB染色来观察。
 
  4.拿掉窗口密封垫和尼龙膜。把膜浸泡在2×SSC中5分钟,然后把膜夹在两层滤纸中在真空干燥箱中80度干燥30分钟。干燥后的膜即可进行杂交。
 
  5.拿掉转印仪上的滤纸并从底盘中倒掉缓冲液,按要求清洗转印仪。
 
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